生物细胞相关实验

篇一：巨噬细胞吞噬实验&沉淀实验实验报告

【原理】巨噬细胞是单核吞噬细胞系统的主要细胞，局域活跃的吞噬功能。吞噬细胞受抗原刺激后活化，可使吞噬功能明显增强。

在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡血红细胞，30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷亚甲蓝染色，显微镜下计数吞噬红细胞的百分数，及观察吞噬细胞内鸡红细胞的数目，以判断吞噬细胞的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。

【方法】体内法：

（1）实验前3小时，小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。

（2）实验时，每只小鼠注射鸡红细胞1ml，轻柔腹部，使其在腹腔中分布均匀，利于吞噬。

（3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用载玻片轻擦腹腔，使腹腔液均匀涂于载玻片过，再滴一滴0.03%冷亚甲蓝溶液，盖上盖玻片。

（4）高倍镜下进行观察，计数。

【分析】

在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液，可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并且可看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。

二 沉淀反应 双向琼脂扩散实验

【原理】将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内，二者均可发生扩散，并且随扩散距离的增大浓度降低，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。本实验是定性实验，常用于分析抗原抗体的纯度关系以及相互关系。

【方法】

（1）制板：将熔化的1%琼脂加在载玻片上约5ml

（2）打孔：待琼脂凝固后，将载玻片置于打孔样板上，用打孔器打孔

（3）加样：在中央孔内加抗体，上下两孔加抗原1，左右加抗原二，每孔加10μl

（4）结果观察：将琼脂板置于湿盒，37℃一天后观察结果。

【结果】

在中央孔与添加抗原1的孔之间出现沉淀线，有抗原抗体反应，为阳性反应，说明抗原1与抗体相对应。中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线，说明抗原2与抗体之间不相对应。

【分析】抗体与抗原发生扩散时，随扩散距离的增大浓度降低，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。当有沉淀线出现时，说明有抗原抗体反应。

琼脂铺板时要一次铺成，并且铺设均匀。

打孔时要注意垂直打孔，注意不要有裂隙产生。

篇二：中性粒细胞吞噬功能试验(小吞噬试验)

中性粒细胞吞噬功能试验（小吞噬试验）

实验目的

1.熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法。

实验原理 血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞，通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个步骤，能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物，是机体非特异性免疫的重要组成部分。 实验材料

实验方法

片。

瑞氏染色法：取瑞氏染液数滴滴于上述血片上先染1分钟。然后加等量蒸馏水， 轻轻晃动混匀，继续染5分钟，水洗，用吸水纸吸干后镜检。

结果观察 油镜检查：寻找中性粒细胞，如果染色结果正确，可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色，而粒细胞的细胞浆则为淡红色。 中性粒细胞吞噬试验

计数：1.吞噬百分率：观察100个中性粒细胞，计算其中吞噬有细菌的'中性粒细胞数，计算出吞噬细胞百分率。 2.吞噬指数：观察100个中性粒细胞，计算其中被吞噬的细菌总

篇三：吞噬细胞吞噬功能检测实验

-----吞噬细胞吞噬功能检测实验 实验概要

本文介绍了吞噬细胞吞噬功能检测（Assay of the Phagocytic Function of Phagocyte）实验的基本原理、操作步骤及注意事项等。

实验原理

吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能，在机体非特异性免疫中发挥重要作用。

小鼠腹腔内注射硫代乙醇酸钠，可刺激巨噬细胞的聚集。四日后小鼠腹腔内注入羊红细胞悬液，一小时后解剖收集腹腔吞嗜细胞，染色、镜检可观察对羊红细胞的吞嗜现象。通过计算吞嗜百分比或吞噬指数可测定吞噬细胞的吞嗜功能。

主要试剂

1. PBS 缓冲液

2. 3％硫代乙醇酸钠

3. 1％羊红细胞悬液

4. 瑞氏染液

5. 甲醇

主要设备

1. 解剖器材

2. 注射器

3. 尖吸管

4. 橡皮吸头

5. 小试管

6. 载玻片

实验材料

ICR 小鼠

实验步骤

1. 实验准备：用无菌注射器吸取3％硫代乙醇酸钠3ml，注射于小鼠腹腔内。

2. 四日后，注射1％羊红细胞悬液1ml 于小鼠腹腔内。

3. 注射1 小时后，将小鼠用颈椎脱臼法处死，解剖暴露腹腔，于腹腔靠上部位，用镊子轻轻夹起腹膜，将腹膜剪一小口，用尖吸管注入5ml 预温的PBS，同时用手反复揉搓腹腔约1—2 分钟，以便尽可能多地冲洗出小鼠腹腔的吞噬细胞。

4. 用尖吸管吸取腹腔液，置一洁净试管内。

5. 用尖吸管将腹腔液吹打均匀(尽量避免产生气泡)，吸取一滴滴于载玻片上，加盖玻片镜检。

6. 观察结果，也可以将腹腔液涂片，平放于湿盘内，37℃，孵育30 分钟。取出涂片，用预温的PBS 冲洗3 次，然后用甲醇固定1 分钟，以瑞氏染液1 份加pH6.4 的PBS 2 份混匀后，滴于涂片上染色5-10 分钟，以蒸馏水冲洗（切勿先将染液倾去）后，待干，镜检。

7. 实验结果

观察小鼠腹腔巨噬细胞和中性粒细胞对羊红细胞的吞噬现象，计算吞噬百分比，即每100 个吞噬细胞中吞噬有羊红细胞的细胞数。也可用吞噬指数表示，即将100 个吞噬细胞中所吞噬羊红细胞的总数除以100，即为吞噬指数。吞噬百分比和吞噬指数一般是平行的。

注意事项

1. 充分揉搓腹腔，尽可能将吞噬细胞冲洗下来。

2. 用尖吸管吸取腹腔液时，尽量避开腹腔脏器，避免损伤血管引起出血，影响实验结果。

3. 用瑞氏染液染色时，切勿先将染液倾去后再冲洗，以免染液中细小颗粒附着于玻片上影响标本的清晰度。