兔儿伞不同溶剂提取物抗自由基的效果实验分析

　　1 材料与仪器

1.1 材料

兔儿伞由安徽师范大学张中信老师于2007-06采自安徽黄山，经安徽师范大学张小平教授鉴定为兔儿伞Syneilesis aconitifolia （Bunge） Maxim.。

1.2 仪器与试剂

WF-4000微波快速反应系统（上海屹尧分析仪器有限公司）；UV1900PPC紫外可见分光光度计（上海亚研电子科技有限公司）；电子天平（北京赛多利斯天平仪器厂）。所有试剂均为分析纯。

　　2 方法

2.1 兔儿伞不同溶剂提取物制备将一定量的兔儿伞干燥粉末置于微波反应釜中，分别以水、乙醇、丙酮、醋酸乙酯为溶剂，料液比为1∶60，微波功率800 W，提取3次，15 min/次，合并提取液，减压浓缩，真空干燥备用。

2.2 羟自由基（·OH）的清除能力采用亚铁离子催化H2O2产生·OH（Fonton反应）的方法［10，11］。取0.75 mol/L邻二氮菲溶液l ml，PBS液2 ml和蒸馏水1 ml，充分混匀后，加0.75 mmol/L硫酸亚铁I ml，混匀，加0.01%的H2O2 l ml，37℃水浴60 min，以PBS液调零，536 nm处测定吸光度，其值记为AP；用l ml蒸馏水代替l ml H2O2，以PBS调零，测得吸光度记为AB；用1 ml试样代替1 ml蒸馏水，以同浓度不加H2O2 的加试样管调零，测得吸光度记为As。·OH清除率（d%）计算公式： d（%）=（As-AP）/（AB-Ap）×100%。

2.3 超氧阴离子自由基（O2- ·）清除能力取0.05 mol/L pH 8.2的Tris一HCl缓冲液4.5 mol于试管中，置25℃水浴预热20 min，加入供试样品0.1ml，2.5 mmol/L邻苯三酚0.4 ml，混匀后在25℃水浴反应4 min加8 mmol/L盐酸两滴终止反应，（299±1）nm处测定吸光度，空白组以0.1 ml蒸馏水代替供试样品，并按下式计算清除率［12］。d%= （A空白-A样品）/A空白×100%。

　　3 结果

不同溶剂提取物对羟自由基的清除作用

兔儿伞不同溶剂提取物对·OH的清除作用如图1所示。乙醇提取物对羟自由基清除率的回归方程是： Y= 1.576 79+ 13.629 04X（R= 0.996 69）， 丙酮提取物对羟自由基清除率的回归方程是：Y=0.43101 + 9.935 53X（R= 0.999 8），水提取物对羟自由基清除率的.回归方程是Y=0.007+5.033 5X（R=0.997 36），醋酸乙酯提取物对羟自由基清除率的回归方程是Y= 6.729+5.614 5X（R=0.969 9），由回归方程可求出兔儿伞的乙醇、丙酮、水、醋酸乙酯提取物对·OH清除率为50%时的提取物浓度（IC50）分别为：3.55，4.99，9.93，7.70 mg/ml 。由此可见，4种溶剂提取物对羟自由基均有一定的清除作用，其中乙醇提取物对羟自由基的清除效果最好。